27 February 2023, 22:00

Предложен новый способ получения белка-усилителя вакцин

Предложен новый способ получения белка-усилителя вакцин
Source: Mufid Majnun / Unsplash

Суть работы вакцин заключается в том, чтобы иммунная система отреагировала на определенный антиген (потенциально опасное вещество, обычно один из белков патогена), который содержится в препарате. Так организм может познакомиться с возбудителем безопасно, не заболевая, и при последующей встрече оперативно его обезвредить. Однако препарат только с целевым антигеном может быть недостаточно эффективным, например, слишком быстро разрушаться в крови и оттого плохо «запоминаться». Усилить его можно при помощи особых добавок — адъювантов. Они служат либо носителями антигена, обеспечивая его длительное циркулирование в организме и даже доставку в определенные иммунные клетки, либо дополнительными раздражителями, которые воспринимается врожденными механизмами защиты и сразу вызывают сильную реакцию.

Ученые ФИЦ Биотехнологии РАН вместе с коллегами из Института иммунологии ФМБА России придумали, как улучшить производство одного из наиболее популярных адъювантов — белка CRM197. Традиционно его получают из мутантной патогенной дифтерийной коринебактерии, но ее культуры растут достаточно медленно и выход продукта мал. Авторы создали новый штамм кишечной палочки, который способен синтезировать целевой белок.

Для удобства они удалили из исходной последовательности природный сигнальный фрагмент и поставили метку из трех нуклеотидов, которая направляет CRM197 в цитоплазму, откуда его несложно извлечь. Также биотехнологи сделали небольшую замену во втором триплете последовательности (кодирует вторую аминокислоту в составе белка), что позволило в 4-5 раз увеличить накопление продукта в клетках. Такой эффект авторы объяснили изменением вторичной структуры матрицы РНК, на которой синтезируется белок. До модификации в этом месте находилась шпилька — петля из-за взаимодействия триплетов, — которая затрудняет посадку на них транспортной РНК с аминокислотами, а значит, и синтез белка происходил не столь эффективно.

Кроме того, исследователи предложили подход к выращиванию культуры и очистке белка. Во-первых, они снизили температуру культивирования на этапе активного синтеза до комнатной, тогда как оптимальная для кишечной палочки — 37°C. Это уменьшило интенсивность наработки белка, но и дало время для его правильного сворачивания (только в таком случае он будет нормально взаимодействовать с иммунными клетками), а также обеспечило оптимальные условия для работы систем бактерии, которые помогают исправить ошибки в укладке. Во-вторых, после разрушения клеток и ультрафильтрации авторы очищали белок в ходе трех этапов хроматографии, пропуская раствор через колонки с разным сорбентом и с разным составом и характеристиками растворителя. Исходно, еще на этапе дизайна ДНК, они удалили последовательности, которые потом все равно пришлось бы удалить, и не добавили новые «хвосты» (их часто вводят, чтобы избирательно выловить белки из раствора, однако от них тоже нужно избавиться), а потому процесс оказался проще. В результате удалось добиться выхода продукта в 150–270 миллиграмм на литр конечной клеточной культуры. Ранее коллегам удавалось достичь в такой системе и с CRM197 не более 150 миллиграмм на литр.

«Созданный штамм-продуцент растворимого CRM197 и разработанный метод очистки могут использоваться для экономически обоснованного производства этого белка и последующего синтеза конъюгированных вакцин против гемофильных, пневмококковых и менингококковых инфекций. Наши результаты уже используются компанией, создающей вакцины для людей, и мы участвуем в разработке новых препаратов», — рассказывает Иван Воробьев, доктор биологических наук, заведующий лабораторией биоинженерии клеток млекопитающих ФИЦ Биотехнологии РАН.

News article publications

Read also

Химики предсказали структуру сильных антибактериальных фотосенсибилизаторов
Наиболее эффективные молекулы расположились параллельно мембране клетки, погрузились в нее и под действием света вызвали выработку разрушительных форм кислорода
Microbiology
Pharmacy
Photochemistry
1 August 2023
Ферменты бактериофагов помогут победить внутрибольничные инфекции
Бактериальные вирусы узнают патогенную бактерию благодаря деполимеразе хвостового шипа. Последняя разрезает разветвленные молекулы полисахаридов во внешней оболочке бактерии и тем самым способствует ее гибели
Microbiology
Pharmacy
Virology
3 July 2023
Новый растительный препарат показал эффективность против кандидоза
При этом он не действует на полезные симбиотические бактерии человека, а значит, прием такого лекарства вызовет меньше побочных эффектов
Medicine
Microbiology
Pharmacy
30 June 2023
Патоген приобрел антибиотикорезистентность без изменения ДНК
Малые дозы антибиотиков, не влияющие на рост и развитие туберкулезных микобактерий, привели к активации их специфических защитных генов, что сделало микроорганизмы суперпатогенами
Medicine
Microbiology
Pharmacy
10 May 2023
Присутствие трех видов бактерий повысило успех иммунотерапии рака
Обнаружение Bifidobacterium adolescentis, Faecalibacterium prausnitzii и Eubacterium rectale в стуле больных в 85% случаев сочеталось с успешным лечением — кишечные микроорганизмы способны влиять на обмен веществ и иммунитет человека-хозяина
Immunology
Microbiology
Oncology
14 March 2023
Пептиды с некодирующих РНК могут стать основой противоопухолевых вакцин
Эти молекулы входят в состав белкового комплекса, на который, в случае нарушений, могут реагировать Т-лимфоциты, однако при раке их активность блокируется. Авторы работы не только придумали, как вернуть их в строй, но и создали на их основе персонифицированную вакцину
Genomics
Immunology
New techniques
Oncology
Pharmacy
1 March 2023