Отдел иммунологии и межклеточных взаимодействий

Необходимо авторизоваться.
Коллектив

В состав Отдела иммунологии и межклеточных взаимодействий входят:

  1. Лаборатория межклеточных взаимодействий.
  2. Группа протеомной иммунорегуляции.

Основные направления исследований:

  1. Изучение особенностей состояния иммунной системы при беременности, а также при различных формах акушерской и гинекологической патологии.
  2. Оценка факторов иммунитета при различных иммунодефицитных состояниях и рецидивирующих инфекциях.
  3. Разработка и назначение методов иммунокоррегирующей терапии при различных формах акушерской и гинекологической патологии, иммунодефицитных состояниях.
  4. Изучение ангиогенеза и влияния на этот процесс клеток иммунной системы.
  5. Изучение взаимодействия клеток трофобласта и клеток иммунной системы.
  6. Изучение микровезикул клеточного происхождения как новых субъектов межклеточной сигнализации.
  7. Изучение роли макрофагов и естественных киллеров в развитии плаценты.

Ежегодно на базе отдела от 5 до 8 студентов различных ВУЗов Санкт-Петербурга (СПбГУ, РГПУ им. А. И. Герцена, ИТМО, Технологический институт, Политехнический университет) выполняют исследования в рамках бакалаврских и магистерских ВКР.

По результатам исследований, проведеных в отделе, с 1993 года защищена 31 кандидатская и 5 докторских диссертаций.

  1. Проточная цитометрия
  2. Проточная сортировка клеток
  3. Культура клеток и тканей
  4. RT-qPCR
  5. Вестерн-блот
  6. Флуоресцентная микроскопия
  7. Конфокальная микроскопия
  8. Иммуноферментный анализ (ИФА)

Спектрофотометр NanoDrop OneC позволяет измерять содержание биологически значимых молекул в микрообъемах (1-2 мкл) и кюветах, это позволяет получить данные при работе с микрообъемами образоцов. Встроенный планшет и передача данных по Wi-Fi устраняет необходимость подключения к ПК. Ускорить анализ позволяют функции автоизмерения и автобланкирования после опускания крышки. Благодаря широкому диапазону измерения для работы прибора не требуется разведения образцов с высокой концентрацией. Технология исследования образцов Thermo Scientific Acclaro:

  • Автоматическая идентификация загрязняющих агентов и исправление результатов концентрации вашего образца.
  • Мгновенное оповещение об отклонениях и доступ к технической поддержке и интегрированному руководству по устранению ошибок.     
  • Целостная картина измерений с анализом цифровых изображений.

Особенности Nano Drop OneC:

  • Позволяет работать как с микрообъемами в капле так и со стандартными кюветами.
  • Измеряет разбавленные образцы, выполняет кинетические измерения и измерения оптической плотности бактериальных культур.
  • Позволяет контролировать температуру нагрева кюветы (до 37°C) 
  • Agilent 1290 Infinity — самый мощный в своей серии жидкостный хроматограф.
  • Это высокотехнологичный прибор для организации большой скорости элюирования и создания высокого хроматографического разрешения в анализе.

Инвертированный флюоресцентный моторизованный микроскоп с CO2-камерой.

CO2-инкубаторы Thermo Scientific™ Heracell™ 150i со 100% медными камерами обеспечивают идеальные условия для культивирования клеток. Они обладают характеристиками быстрого восстановления заданных параметров и удобным пользовательским интерфейсом с сенсорным экраном. Безопасны для культивируемых клеток.

Biowizard Silver Line — ламинарно-потоковый шкаф с микропроцессорным контролем и сенсорной панелью управления, соответствует международному стандарту EN 12469. Очищенный HEPA-фильтрами воздух равномерным вертикальным потоком опускается внутри рабочей зоны, создавая стерильные условия. Эффективность фильтрации составляет 99,9997% для частиц размером 0,3 мкм (класс чистоты ISO 5).

Амплификатор детектирующий ДТ-96 предназначен для проведения качественных и количественных исследований ДНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), при использовании реагентов, использующих эффект флуоресценции.

Благодаря сочетанию инновационных технических решений, надежности, простоте и гибкости настроек ДТ-96 является оптимальным выбором как для крупных лабораторий с высокой пропускной способностью, так и для научных учреждений, в которых большое значение имеет возможность тонкой настройки и оптимизации анализа.

Цитофлуориметр клеточный сортер BD FACSAria™ III предназначен для высокопроизводительного сортинга на основе многоцветной проточной цитометрии. Эта система сочетает в себе новейший оригинальный технический дизайн с простым программным обеспечением. Прибор не требует при установке подключения внешних устройств регулировки давления и систем водяного охлаждения, что делает возможным его использование в любой лаборатории. Благодаря запатентованной конструкции оптической и проточной систем, а также автоматизации процессов настройки системы, прибор обеспечивает экспертный уровень анализа и сортировки для различных приложений проточной цитометрии.

Проточный цитометр BD FACSCanto II – прибор для полноценного многопараметрического анализа, позволяющий свободно комбинировать до 8 флуоресцентных меток с минимальными ограничениями в выборе сочетаний флуорохромов. Автоматизация процедуры запуска, контроля качества, выключения и плановой промывки обеспечивает простоту эксплуатации.

Помещение для культуральной работы
Помещение для культуральной работы
Проточная цитометрия
Проточная цитометрия
Помещение для культуральной работы
Помещение для культуральной работы
Помещение для культуральной работы
Помещение для культуральной работы
Помещение для культуральной работы
Помещение для культуральной работы
Дмитрий Соколов 🥼 🤝
Заведующий лабораторией
Сельков Сергей Алексеевич
Сергей Сельков 🤝
Главный научный сотрудник
Валентина Михайлова 🥼 🤝
Старший научный сотрудник
Марко Оксана Б
Оксана Марко
Младший научный сотрудник
Алина Давыдова
Младший научный сотрудник
Полина Гребенкина
Младший научный сотрудник
Тищук Елизавета
Младший научный сотрудник
Мария Зементова
Лаборант-исследователь
Марина Перевязкина
Лаборант-исследователь
Варвара Юхина 🤝
Студент

Направления исследований

Клеточные линии как материалы для моделирования межклеточных взаимодействий маточно-плацентарного комплекса

+
Клеточные линии как материалы для моделирования межклеточных взаимодействий маточно-плацентарного комплекса
Отдел располагает следующими клеточными линиями, которые используются при моделировании in vitro различных межклеточных взаимодействий: NK-92, NK-92 MI - клеточные линии естественных киллеров, полученных от пациента с неходжкинской лимфомой, имеют все основные морфофункциональные признаки, характерные для цитотоксических NK-клеток; JEG-3, BeWo - клеточные линии хориокарциномы человека, имеющие основные морфофункциональные признаки экстравиллезного трофобласта I триместра беременности; Ea.Hy926 - гибридная клеточная линия первичных эндотелиальных клеток пуповины с клоном карциномы A549, воспроизводит основные характеристики эндотелиальных клеток; THP-1 - клеточная линия острого миелоидного лейкоза, воспроизводит основные характеристики моноцитов; K562 - клеточная линия хронической миелогенной лейкемии, клетки могут развивать характеристики, схожие с эритроцитами, гранулоцитами и моноцитами на ранних стадиях; HeLa - клеточная линия цервикальной карциномы.

Изучение роли макрофагов и естественных киллеров в развитии плаценты

+
Изучение роли макрофагов и естественных киллеров в развитии плаценты
В нашей лаборатории было показано, что развитие плаценты сопровождается усилением признаков активации макрофагов как М1, так и М2, что отражает функциональное созревание популяции макрофагов ворсин хориона. Соотношение между уровнями активации конкретных популяций зависит от срока гестации. Сочетание провоспалительных и регуляторных свойств обусловливает обеспечение противоинфекционной защиты и модуляцию свойств и функций других клеток маточно-плацентарного комплекса. Выявленные нами характеристики свидетельствуют о том, что на ранних стадиях преобладает регуляторная функция в отношении структурных элементов формирующегося маточно-плацентарного комплекса; при этом провоспалительный потенциал популяции макрофагов снижен, что обеспечивает развитие плаценты и сохранение беременности на этапе плацентации. Ослабление регуляторных и усиление провоспалительных свойств в III триместре беременности отражает снижение интенсивности морфогенетических процессов в зрелой плаценте, усиление противоинфекционного иммунитета и подготовку к родовому акту. Подавление продукции провоспалительных цитокинов и экспрессии активирующих рецепторов представляют собой способы модуляции функций плацентарных макрофагов, обеспечивающие физиологическое развитие плаценты и сохранение беременности. Нарушение этих регуляторных взаимодействий может приводить к повышению уровня активации макрофагов, что представляет собой один из возможных патогенетических факторов при возникновении акушерских патологий. Плацентарные макрофаги могут также участвовать в регуляции воспалительных процессов и вне плаценты, тогда как регуляторные эффекты макрофагов в отношении неиммунных процессов носят преимущественно локальный характер.

Разработка методов, позволяющих in vitro оценить потенциальный эффект иммунокоррегирующей терапии

+
Разработка методов, позволяющих in vitro оценить потенциальный эффект иммунокоррегирующей терапии
Иммуноглобулины для внутривенного введения (ВВИГ) являются одним из препаратов, применяемых для преодоления бесплодия и неудач имплантации. Показано, что применение препарата при подготовке к процедуре ЭКО увеличивает вероятность успешной имплантации бластоцисты, однако точный механизм действия ВВИГ остается неясным. Предполагают его возможное влияние на цитотоксическую функцию NK-клеток, которые способны проявлять цитотоксичность в отношении клеток трофобласта плода. Нами разработан метод оценки цитопротективного эффекта ВВИГ в отношении клеток трофобласта линии JEG-3 в модели их взаимодействия с NK-клетками. Мы показали, что гибель клеток трофобласта в присутствии NK-клеток периферической крови фракции мононуклеаров и препарата ВВИГ снижена по сравнению с пробами без добавления ВВИГ. Предложенную модель можно использовать на этапе подбора терапии при различных формах репродуктивной патологии, при которых планируется использование ВВИГ, в том числе при бесплодии (Патент № 2768461).

Изучение микровезикул клеточного происхождения как новых субъектов межклеточной сигнализации

+
Изучение микровезикул клеточного происхождения как новых субъектов межклеточной сигнализации
Микровезикулы (МВ) вырабатываются различными клетками и являются источником различных белковых и небелковых молекул. Предполагается, что МВ могут опосредовать межклеточную коммуникацию и модулировать функции клеток. Актуальным вопросом является способность МВ, полученных из NK-клеток, влиять на функциональное состояние эндотелиальных клеток (ЭК) при воспалительных процессах. Мы изучили влияние МВ, полученных из клеток линии NK-92, стимулированных IL-1β, на фенотип, активность каспаз, пролиферацию и миграцию ЭК линии EA.hy926. Установлено, что инкубация ЭК с МВ, полученными из клеток линии NK-92 приводит к снижению пролиферативной активности ЭК, появлению на них панлейкоцитарного маркера CD45, активации каспазы-3 и частичной гибели ЭК, а также снижению экспрессии CD105. Обнаружен более выраженный эффект МВ, полученных из стимулированных клеток линии NK-92, в снижении миграционной активности ЭК и интенсивности экспрессии ими молекулы CD54. Таким образом, функциональная активность МВ опосредована условиями, в которых они секретируются, а также их внутренним содержанием. Кроме того, мы оценили возможность использования МВ в качестве диагностического маркера наружного генитального эндометриоза (НГЭ). Проанализированы фенотипические характеристики МВ лейкоцитарного происхождения в периферической крови пациенток с НГЭ I-II. У пациенток с НГЭ по сравнению со здоровыми женщинами в плазме повышено количество МВ, экспрессирующих CD14 и CD16. Анализ совместной экспрессии лейкоцитарных маркеров на МВ выявил, что у женщин с НГЭ по сравнению со здоровыми женщинами снижено количество МВ с фенотипом CD45+CD4+, CD3+CD4+ и CD3+CD8+ и повышено количество МВ с фенотипом CD54+CD14+ Таким образом, фенотипические характеристики МВ у женщин больных НГЭ отличаются от таковых у здоровых женщин, полученные данные могут быть использованы для разработки методов неинвазивной диагностики НГЭ (Патент № 2761539).

Изучение ангиогенеза и влияния на этот процесс клеток иммунной системы

+
Изучение ангиогенеза и влияния на этот процесс клеток иммунной системы
Регуляция ангиогенеза в маточно-плацентарном русле определяет адекватную инвазию трофобласта, формирование и развитие плаценты, а также успешное течение беременности. Наиболее значительное влияние на ангиогенез оказывают естественные киллерные (NK) клетки, макрофаги и трофобласт. Мы создали модель in vitro, отражающую взаимодействие NK-клеток, трофобласта и эндотелия во время ангиогенеза, чтобы изучить контактное и дистантное влияние NK-клеток на формирование трубкообразных структур путем совместного культивирования клеток эндотелия и трофобласта под влиянием различных цитокинов (bFGF, VEGF, PlGF, TGF-β, IL-8, IFNγ и IL-1β). Нами было показано, что влияние цитокинов на ангиогенез в трехкомпонентной кокультуре (NK-клетки, клетки трофобласта и клетки эндотелия) отличались от тех, которые были выявлены ранее в однокомпонентных (только клетки эндотелия) и двухкомпонентных (кокультура клеток эндотелия и клеток трофобласта) клеточных моделях. Результаты этих экспериментов показали, что регуляция взаимодействий плацентарных клеток включает как клеточные контакты, так и эффекты, опосредованные цитокинами. Кроме того, в рамках данного направления ведется работа по созданию предиктивной модели ангиогенеза на базе искусственного интеллекта совместно с НИИ системного программирования им. В. П. Иванникова РАН.

Изучение взаимодействия клеток трофобласта и клеток иммунной системы

+
Изучение взаимодействия клеток трофобласта и клеток иммунной системы
Цитокины, секретируемые клетками микроокружения децидуальной оболочки матки, могут влиять на фенотипические характеристики NK-клеток и изменять их функциональную активность. Дисбаланс про- и противовоспалительных сигналов может привести к развитию репродуктивной патологии. Мы оценили воздействие ряда цитокинов на NK-клетки линии NK-92 и NK-клеток периферической крови в присутствии клеток трофобласта линии JEG-3 в модели in vitro. Показано влияние IFNγ, TNFα, TGFβ, IL-15, IL-18 на экспрессию NK-клетками ряда активирующих и ингибирующих рецепторов как в монокультуре, так и при сокультивировании с клетками трофобласта, а также в присутствии кондиционированных сред плацент 1 триместра беременности. Полученные результаты указывают на модуляцию функции NK-клеток как цитокиновым микроокружением, так и непосредственно клетками-мишенями.

Публикации и патенты

Найдено 
Валентина Анатольевна Михайлова, Алина Алексеевна Давыдова, Дмитрий Олегович Баженов, Валерия Алексеевна Загайнова, Игорь Юрьевич Коган, Олеся Николаевна Беспалова, Александр Мкртичевич Гзгзян, Дмитрий Игоревич Соколов, Сергей Алексеевич Сельков
RU2768461C1, 2022
Мария Игоревна Ярмолинская, Елена Игоревна Дурнева, Дмитрий Игоревич Соколов, Ксения Львовна Маркова, Сергей Алексеевич Сельков
RU2761539C1, 2021
Дмитрий Игоревич Соколов, Ксения Львовна Маркова, Сергей Алексеевич Сельков
RU2746950C1, 2021

Партнёры

Адрес лаборатории

Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, 3Д
Необходимо авторизоваться.